生物顯微鏡作為生命科學(xué)研究的核心工具，其物鏡性能直接影響觀察效果與數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。本文從光學(xué)校正、機械設(shè)計、功能特性等維度，系統(tǒng)梳理生物顯微鏡常用物鏡類型，并結(jié)合實際應(yīng)用場景提供選擇建議，助力科研與教學(xué)工作者高效選型。

一、按光學(xué)校正類型分類

1.1 消色差物鏡（Achromat）

核心特性：校正紅、藍(lán)兩色光的軸向色差及黃綠光球差，但綠光像場彎曲未完全校正。視野中央60%區(qū)域清晰，外周40%存在輕微缺陷。

應(yīng)用場景：常規(guī)明場觀察，適合預(yù)算有限的教學(xué)實驗室或基礎(chǔ)科研（如細(xì)胞形態(tài)初篩、病理切片檢測）。

代表型號：奧林巴斯Plan Achromat系列、尼康CFI Achromat系列。

1.2 半復(fù)消色差物鏡（Semi-Apochromat）

核心特性：在消色差基礎(chǔ)上進(jìn)一步校正紅、藍(lán)、綠三色光色差及球差，像場彎曲顯著改善。部分型號（如“Plan Fluor”）通過特殊鍍膜提升透光率。

應(yīng)用場景：熒光顯微鏡、相差顯微鏡等中等分辨率需求場景，如活細(xì)胞動態(tài)觀察、免疫熒光標(biāo)記檢測。

代表型號：蔡司EC Plan-Neofluar系列、徠卡HI Plan系列。

1.3 復(fù)消色差物鏡（Apochromat, APO）

核心特性：全光譜色差校正（紅、藍(lán)、綠及紫光），球差與剩余色差均達(dá)Z優(yōu)。數(shù)值孔徑（NA）高達(dá)1.4以上，分辨率提升至200nm級。

應(yīng)用場景：高分辨熒光成像（如超分辨STED顯微鏡）、共聚焦顯微鏡、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察（如線粒體膜電位檢測）。

代表型號：尼康A(chǔ)PO VC系列、蔡司Alpha Plan-Apochromat系列。

二、按機械系統(tǒng)設(shè)計分類

2.1 有限遠(yuǎn)物鏡（Finite Correction）

核心特性：基于160mm或170mm固定機械筒長設(shè)計，光路需與特定鏡筒匹配。物鏡與目鏡間存在固定共軛距離，不可與無限遠(yuǎn)系統(tǒng)混用。

應(yīng)用場景：傳統(tǒng)正置顯微鏡（如奧林巴斯BX系列、尼康ECLIPSE Ci系列），適合常規(guī)教學(xué)與基礎(chǔ)科研。

代表型號：奧林巴斯UMPlanFl系列、尼康CFI Plan Fluor系列。

2.2 無限遠(yuǎn)物鏡（Infinity-Corrected）

核心特性：光路為平行光束（標(biāo)記“∞”），需通過鏡筒透鏡（Tube Lens）聚焦。機械筒長無嚴(yán)格限制，但需匹配鏡筒透鏡焦距（常見200mm、180mm）。

應(yīng)用場景：現(xiàn)代G端顯微鏡（如蔡司Axio Imager、徠卡DM6000 B），支持熒光模塊、DIC棱鏡等擴展，兼容性更強。

代表型號：蔡司EC Plan-Neofluar系列、徠卡HI Plan系列。

三、按功能特性分類

3.1 相差物鏡（Phase Contrast）

核心特性：內(nèi)置環(huán)形相位板，將光程差轉(zhuǎn)換為振幅差，增強透明樣本（如活細(xì)胞、細(xì)菌）對比度。需配合專用聚光鏡使用。

應(yīng)用場景：活細(xì)胞培養(yǎng)觀察（如細(xì)胞遷移、分裂過程）、未染色樣本檢測（如血液涂片分析）。

代表型號：奧林巴斯UPLFLN系列、尼康CFI Ph系列。

3.2 熒光物鏡（Fluorescence）

核心特性：高透光率（紫外至近紅外波段），鍍膜減少自發(fā)熒光。部分型號（如“APO”）支持多色熒光成像，NA值達(dá)1.4以上。

應(yīng)用場景：熒光標(biāo)記蛋白定位（如GFP）、免疫熒光檢測、FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）實驗。

代表型號：蔡司Alpha Plan-Apochromat系列、尼康A(chǔ)PO TIRF系列。

3.3 長工作距離物鏡（Long Working Distance, LWD）

核心特性：工作距離達(dá)數(shù)毫米至厘米級，避免物鏡與樣本接觸。部分型號（如“LWD”標(biāo)識）兼容厚樣本（如培養(yǎng)皿、工業(yè)材料）。

應(yīng)用場景：活細(xì)胞培養(yǎng)皿觀察、芯片封裝檢測、材料表面形貌分析。

代表型號：奧林巴斯LUMPLFLN系列、尼康CFI LWD系列。

3.4 明暗場物鏡

明場物鏡：依賴樣本吸收形成對比，NA值0.4-1.4，適合常規(guī)染色樣本觀察。

暗場專用物鏡：通過低NA設(shè)計（NA<0.7）或特殊鍍膜，僅接收散射光，形成暗背景亮物像。需配合暗場聚光鏡使用。

應(yīng)用場景：暗場顯微鏡（如納米顆粒檢測）、透明樣本（如細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)）觀察。

四、選擇物鏡的關(guān)鍵因素

4.1 放大倍數(shù)與分辨率需求

低倍物鏡（2x-10x）：視野廣，適合大樣本整體觀察（如病理切片初篩）。

中高倍物鏡（20x-60x）：平衡分辨率與景深，適合細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察（如細(xì)菌形態(tài)分析）。

高倍物鏡（100x油鏡）：NA值≥1.4，需配合浸油使用，適合亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察（如染色體分析）。

4.2 工作距離與樣本厚度

短工作距離物鏡（0.1-0.2mm）：高倍油鏡，適合薄樣本（如細(xì)胞涂片）。

長工作距離物鏡（數(shù)毫米至厘米）：兼容厚樣本（如培養(yǎng)皿、工業(yè)材料）。

4.3 光學(xué)系統(tǒng)兼容性

有限遠(yuǎn) vs 無限遠(yuǎn)：傳統(tǒng)顯微鏡選有限遠(yuǎn)（160mm），現(xiàn)代G端設(shè)備選無限遠(yuǎn)（兼容擴展模塊）。

接口類型：確認(rèn)物鏡接口（如奧林巴斯RMS、尼康CF等）與顯微鏡主機匹配。

4.4 特殊功能需求

熒光成像：選擇高透光率、低自發(fā)熒光的物鏡（如APO系列）。

活細(xì)胞觀察：優(yōu)先長工作距離物鏡，避免樣本壓損。

暗場/相差：需配套專用聚光鏡或相位板。

五、應(yīng)用案例與選型建議

5.1 教學(xué)實驗室

需求：預(yù)算有限，需覆蓋基礎(chǔ)觀察與簡單熒光實驗。

推薦：奧林巴斯CX23（標(biāo)配消色差物鏡，可選配熒光模塊），尼康ECLIPSE Ci（半復(fù)消色差物鏡，性價比高）。

5.2 科研實驗室

需求：高分辨率、多模式成像（如熒光、DIC）。

推薦：蔡司Axio Imager.Z2（無限遠(yuǎn)物鏡，支持模塊擴展），徠卡DM6000 B（復(fù)消色差物鏡，適配超分辨成像）。

5.3 工業(yè)檢測

需求：長工作距離、兼容厚樣本（如芯片封裝）。

推薦：奧林巴斯MX61（長工作距離物鏡，支持明暗場切換），尼康CFI LWD系列（工作距離達(dá)10mm）。

生物顯微鏡物鏡的選擇需綜合考慮光學(xué)校正類型、機械系統(tǒng)設(shè)計、功能特性及實際需求。消色差物鏡適合基礎(chǔ)教學(xué)，半復(fù)/復(fù)消色差物鏡適配科研與熒光成像，長工作距離與特殊功能物鏡則滿足工業(yè)檢測與活細(xì)胞觀察等場景。通過匹配放大倍數(shù)、工作距離及光學(xué)系統(tǒng)兼容性，可實現(xiàn)Z佳成像效果與科研效率。